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EpiNext? Post-Bisulfite DNA 文庫(kù)制備試劑盒是一整套優(yōu)化的試劑，用于在亞硫酸氫鹽成功轉(zhuǎn)化后制備 DNA 文庫(kù)，用于各種基于 Illumina 平臺(tái)的亞硫酸氫鹽測(cè)序 （bisulfite-seq） 分析，例如全基因組亞硫酸氫鹽測(cè)序 （WGBS）、氧化亞硫酸氫鹽測(cè)序 （oxBs-seq）、還原代表性亞硫酸氫鹽測(cè)序 （RRBS） 和其他基于亞硫酸氫鹽的下一代測(cè)序應(yīng)用。該試劑盒的優(yōu)化方案和組分允許使用亞納克起始濃度的 DNA 快速構(gòu)建非條形碼（單重）和條形碼（多重）DNA 文庫(kù)，因?yàn)?DNA 首先被亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，然后用于文庫(kù)制備。該套件具有以下優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)：

• 允許將亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的 DNA 直接用于連接，從而消除了目前使用的 WGBS 和 RRBS 方法中經(jīng)常發(fā)生的接頭連接片段斷裂的可能性。
• 從起始材料起始材料到文庫(kù)擴(kuò)增，只需 5 小時(shí)即可完成快速作。
• 無(wú)凝膠大小選擇/純化可節(jié)省時(shí)間并防止處理錯(cuò)誤以及寶貴樣品的損失。
• 高靈敏度和高效率 — 接頭直接連接到亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化的 DNA 片段上，減少了片段損失和選擇偏差，這使得前亞硫酸氫鹽起始 DNA 的起始量低至 1 ng。該試劑盒可用于無(wú)條形碼（單重）和條形碼（多重）DNA 文庫(kù)制備。
• **的組分集，可適應(yīng) DNA 文庫(kù)制備的每個(gè)步驟（連接、純化、大小選擇和文庫(kù)擴(kuò)增），以實(shí)現(xiàn)便利性、一致性和可靠性。
• Ultra HiFi 擴(kuò)增能夠?qū)崿F(xiàn)可重現(xiàn)的高產(chǎn)量 DNA 文庫(kù)，同時(shí)具有*小的序列偏差和低錯(cuò)誤率。

背景信息
目前有幾種方法，包括全基因組亞硫酸氫鹽測(cè)序 （WGBS） 和亞硫酸氫鹽低表達(dá)測(cè)序 （RRBS），用于全基因組 DNA 甲烷化分析。這些方法將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而 5-甲基胞嘧啶在亞硫酸氫鹽處理下保持不變。這使得表觀遺傳差異成為遺傳差異，隨后可以通過(guò)基于單一分辨率水平和全基因組尺度的測(cè)序來(lái)檢測(cè)。然而，目前這種方法的實(shí)際應(yīng)用并不理想，因?yàn)樗鼈?（1） 需要大量的 DNA （>1 μg） 作為輸入材料，這很難從有限的生物樣品（如腫瘤活檢、早期 embyros、embyronic 組織和循環(huán) DNA）中制備;（2） 需要先剪切 DNA，然后連接到接頭上，然后進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（連接后亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化），這會(huì)導(dǎo)致接頭 DNA 片段構(gòu)建體中的大量 DNA 片段斷裂，從而形成單標(biāo)簽?zāi)０?，這些模板在文庫(kù)富集過(guò)程中被去除;（3） 耗時(shí) （2 天）。EpiNext Post-Bisulfite DNA 文庫(kù)制備試劑盒旨在克服這些弱點(diǎn)。

原理和程序
使用此試劑盒，亞硫酸氫鹽處理的DNA（為單鏈形式）被轉(zhuǎn)化為雙鏈DNA，并直接用于與擴(kuò)增和測(cè)序所必需的BisDNA特異性適配器進(jìn)行連接。然后對(duì)片段進(jìn)行大小選擇，并使用 MQ 微珠進(jìn)行純化，從而可以快速、**地選擇 DNA 大小。然后用高保真 PCR 混合物擴(kuò)增大小選擇的 DNA 片段，確保以*少的起始材料獲得*大產(chǎn)量，并以低錯(cuò)誤率和*小偏差提供高度準(zhǔn)確的文庫(kù) DNA 擴(kuò)增。