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MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation (5-hmC) ELISA Easy Kit (Colorimetric)是一整套優(yōu)化的緩沖液和試劑，通過以簡化的“一步法”ELISA 形式特異性測量 5-羥甲基胞嘧啶 （5-hmC） 水平，以比色法定量整體 DNA 羥甲基化狀態(tài)。作為 Epigentek 廣受歡迎的全局 DNA 甲基化技術的第四代技術，它通過提高速度、簡單性、靈敏度和可重復性，對前代 MethylFlash 試劑盒進行了進一步改進。

該試劑盒還經(jīng)過專門優(yōu)化，可與 MethylFlash Global DNA 甲基化 （5-mC） ELISA Easy 試劑盒（比色法）配合使用，同時定量甲基化 DNA 和羥甲基化 DNA。

該套件具有以下優(yōu)點和特點：

• 快速 - 減少步驟，整個過程只需 2 小時*
• 穩(wěn)健 - 改進的試劑盒組成使分析具有更大的“信號窗口”，同時減少重復之間的變化
• 方便 - 固有的低背景噪音，因此無需 DNA 變性和板封閉步驟
• 靈敏 — 檢測限可低至 100 ng 起始 DNA 中 0.01% 羥甲基化 DNA
• 特異性 - 對 5-hmC 具有高度特異性，在樣品 DNA 的指定濃度范圍內(nèi)，與未甲基化的胞嘧啶或甲基化的胞嘧啶沒有交叉反應性
• 通用 — 陽性和陰性對照，可從單鏈或雙鏈起始 DNA 中檢測任何物種的 DNA 羥甲基化
• 準確 — 優(yōu)化的陽性對照，可按百分比刻度進行分級分離，使分析更加準確，并與 HPLC-MS 分析具有高度可比性
• 靈活 - 條孔板規(guī)格使該分析可用于手動或高通量分析

* 基于一式兩份的單個樣品檢測

背景
5-羥甲基胞嘧啶 （5-hmC） 作為具有轉錄調(diào)節(jié)功能的第六個 DNA 堿基，已被檢測到在人和小鼠大腦以及胚胎干細胞 （ES） 細胞中含量豐富。在哺乳動物中，它可以由 5-mC 的氧化產(chǎn)生，這是一種由 5-mC-羥化酶的 10-11 易位 （TET） 家族介導的反應。5-hmC 已被證明具有組織特異性，范圍從培養(yǎng)細胞系中檢測不到的水平到人腦組織中的 0.6%，在其他一些物種中可高達總 DNA 的 8%。5-hmC 作為表型和基因表達的重要表觀遺傳修飾的生物學意義*近已得到認可。例如，5-hmC 含量的整體降低（DNA 低甲基化）幾乎在所有癌癥中都表現(xiàn)出來，并且也被提議作為癌癥的分子標志物和治療靶點。

原則和程序
該試劑盒包含定量 DNA 羥甲基化所需的所有試劑。在該檢測中，DNA 與經(jīng)過專門處理的條帶孔結合，具有很高的 DNA 親和力。使用基于 5-hmC mAb 的檢測復合物一步法檢測 DNA 的羥甲基化部分，然后通過在微孔板分光光度計中讀取吸光度進行比色定量。羥甲基化 DNA 的百分比與測得的 OD 強度成正比。